體內(nèi)堿性彗星試驗在化合物遺傳毒性評價中的應(yīng)用日益廣泛。ICH S2(R1) 已將肝臟彗星試驗列為第 2 個組織/終點的體內(nèi)試驗;體內(nèi)哺乳動物堿性彗星試驗的指導(dǎo)原則(TG489)也已頒布。體內(nèi)堿性彗星實驗?zāi)軌驒z測 DNA 鏈斷裂、堿性不穩(wěn)定位點、不完整切除修復(fù)引起的 DNA 鏈的斷裂,能夠制成合適細胞懸液的組織 DNA 損傷。與其他試驗相比其檢測的是單細胞水平的 DNA 損傷,因此該試驗敏感性較高,操作簡單,經(jīng)濟省時。
一、彗星試驗原理
彗星試驗(Comet Assay),亦稱單細胞凝膠電泳試驗,是一種通過檢測DNA鏈損傷判斷遺傳毒性的技術(shù)。它能有效地檢測并定量分析細胞中DNA單、雙鏈缺口損傷的程度。當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性DNA損傷因子誘發(fā)細胞DNA鏈斷裂時,其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞,在細胞裂解液作用下,細胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞,細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴散到細胞裂解液中,而核DNA由于相對分子質(zhì)量太大只能留在原位。
在中性條件下,DNA片段可進入凝膠發(fā)生遷移,而在堿性電解質(zhì)的作用下,DNA發(fā)生解螺旋,損傷的DNA斷鏈及片段被釋放出來。由于這些DNA的相對分子質(zhì)量小且堿變性為單鏈,所以在電泳過程中帶負電荷的DNA會離開核DNA向正極遷移,從而形成彗星狀圖像,而未受損傷的DNA部分則保持球形。因此,可根據(jù)電泳緩沖液PH值不同,進一步分為中性彗星試驗(PH=8.4)和堿性彗星試驗(PH>13),前者主要用于檢測DNA雙鏈的斷裂損傷,后者則具有更高的靈敏性,可用于檢測更少量的單鏈和雙鏈的斷裂損傷。
通常,DNA受損越嚴重,其產(chǎn)生的斷鏈和斷片就越多,長度也越小,在相同電泳條件下遷移的DNA量就越多,遷移距離也越長。因此,可通過測定DNA遷移部分的光密度或長度來判定單個細胞的DNA損傷程度,從而確定受試物的作用劑量與DNA損傷效應(yīng)的關(guān)系。
陰性對照
陽性對照
二、IPHASE產(chǎn)品
IPHASE作為體外研究生物試劑引·領(lǐng)者,針對堿性彗星試驗成功開發(fā)彗星試驗試劑盒及其相應(yīng)載玻片,省去了客戶溶液配制時間,大大縮短了試驗周期,且試劑盒各組分均經(jīng)過嚴格的質(zhì)量檢測和多次試驗驗證,符合堿性彗星試驗要求。
產(chǎn)品名稱 規(guī)格
彗星試驗試劑盒 20/50 Test
彗星試驗載玻片,2孔 2/25 張
便捷性
提供單細胞凝膠電泳所需試劑和耗材,可以直接使用,大大縮短了實驗周期。
準確性
試劑盒各成分均經(jīng)過嚴格的質(zhì)量檢測,實驗結(jié)果準確、可靠、重現(xiàn)性高。
穩(wěn)定性
本試劑盒穩(wěn)定性強、易于運輸和保存。
應(yīng)用廣
應(yīng)用范圍廣,可用于食品、化學(xué)品、農(nóng)藥、消毒劑、食品添加劑、化妝品、醫(yī)療器械等多個方面的遺傳毒理學(xué)檢測。
IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗,推出了多領(lǐng)域、多種類的高·端科研試劑,為藥物早期研發(fā)提供篩選工具,為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段,為遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品。此外,IPHASE/匯智和源可提供特殊產(chǎn)品的定制服務(wù),望廣大科研工作者咨詢。
發(fā) 文 章 得 獎 勵
凡使用本公司產(chǎn)品,在國內(nèi)及國際刊物上發(fā)表論文(論文發(fā)表日起一年內(nèi)),并注明產(chǎn)品屬于IPHASE BIOSCIENCES/匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司所有,即可申請獎勵。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同,給予不同金額獎品:
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